vrbet888注册开户 苹果手机试玩网站 | | 出处：当代水产 作者：林伟、吴坤杰、杨治国 vrbet888 2014-06-06 22:57:00 |
招财鱼（Osphronemus goramy），学名长丝鲈，属攀鲈科。鱼体侧面观呈椭圆形，腹鳍为细长的丝鳍，故名之长丝鲈。成鱼全身呈金黄色，鳞片边缘透着淡淡的红色金属光泽，在光线照射下全身散发出金色光芒。招财鱼的名称和色彩在中国文化中具有不可抗拒的魅力，因此在观赏鱼市场上颇受欢迎，体长20~50cm商品鱼价格在100~1000元/尾不等。
该鱼原产于南美洲亚马逊河，体格强壮，抗逆性强，野生条件下极少生病。但最近几年，在养殖过程中出现一种被称为“红斑病”的疾病时有发生，给广大观赏鱼爱好者和养殖者、经营者造成巨大的经济损失。2009年9~12月我市某水族商店经销的招财鱼发生该病，累计死亡近百尾，损失5万余元。该病的外观症状类似草鱼赤皮病和鱼类溃疡综合症，但业者参照草鱼赤皮病和鱼类溃疡综合症的控制方法治疗并无疗效。经过我校水产动物病害教研室解剖检查，病鱼有腹水，肌肉、心脏、肝脏、肾脏、脾脏、生殖腺、肠系膜等有明显的黄白色结节，体表“红斑”是由于皮肤中的结节溃烂所引起的。将结节内含物作涂片镜检，发现大量有分枝的短杆状或细长杆状的革兰氏阳性菌体，初步诊断为革兰氏阳性杆菌结节症。故业者参照草鱼赤皮病和鱼类溃疡综合症的控制方法治疗无效。
诺卡氏菌存在于淡水和土壤中，一般认为诺卡氏菌只感染受伤的鱼体，属于偶发的慢性疾病，群体发病率低，死亡率也不高。目前已知的感染鱼类有虹彩脂鲤(Hyphessobrycon innesi)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)、黄尾鰤(Seriola quinqueradiata)、红鲑(Oncorhynchus nerka)、大黄鱼(Larimichthys crocea)、乌鳢(Ophiocealu sargus)、叉尾斗鱼(Macropodus opercularis)、毛足鲈(Trichogaster trichopterus)和大口黑鲈(Micropterus salmonoides)。天然水体中诺卡氏菌的含量并不高，且在清洁水体中仅能生存几天，但在污染的水体中生存期则延长。王国良等(2005)报告自然情况下网箱养殖大黄鱼感染诺卡氏菌(Noc. Seriolae)是由于网箱养殖的集约化程度高，养殖密度大，鱼体容易损伤，体质下降，给病原菌提供了致病机会。Chen(1992)认为诺卡氏菌是一种机会致病菌，当养殖鱼类体质虚弱、免疫力低下时，通过呼吸或饵料而感染。2006年南阳市鸭河口水库池塘饲养的加州鲈鱼发生诺卡氏菌病，杨治国等（2009）认为是由于滥用水质改良剂和底质改良剂所引起。
综上所述，鱼类感染诺卡氏菌病的机理尚不清楚，这为控制该病带来诸多困难。同时，由于该病病情缓慢，在发病前期无症状或症状不明显，病程持续时间长，给该病的早期诊断和防治带来极大困难，一旦发现生病，损失在所难免，故有必要对淡水鱼类诺卡氏菌病的发生机理和防治技术进行系统性研究。
有关招财鱼诺卡氏菌病发病机理及病理变化研究，目前没有相关报道。通过感染实验和病理切片观察以及药物敏感实验，希望弄清招财鱼诺卡氏菌病的发病机理，并寻找出有效的控制方法，为防治淡水鱼类诺卡氏菌病提供技术支撑。
1 试验部分
1.1 细菌分离培养
选取具有典型症状的濒死病鱼，无菌操作取少量心、脾、肾组织上的白色结节分别在TSA，和小川平板培养基上划线分离，28℃恒温培养7～10d后纯化细菌，分离一种菌株。在TSA 培养基上培养分离菌株，28℃恒温培养7～10d后观察菌丝体。
1.2 回归感染
实验用鱼体长24～26cm ，体重150～200g，分注射、口灌、浸泡和3个对照组，每组15 尾。在160升的观赏鱼缸里面进行，试验水温28~30℃。分离菌株在TSA 斜面上28℃培养7d后，用无菌生理盐水洗下菌苔，稀释成所需浓度的菌悬液(平板倾注法计算菌悬液浓度) ，进行腹腔注(IP)，口灌感染(IG)。每尾注射0.5mL，口灌每尾1mL。两对照组分别注射和口灌等量的无菌生理盐水。
将分离菌株于3000mLTSA 液体培养基中扩大培养7d，然后在4℃、8000 r·min - 1下，离心30 min ，无菌的生理盐水清洗沉淀3次，再用无菌的生理盐水配制成3000mL菌悬液，平板倾注法计算菌悬液浓度。在水族箱中将菌液用养殖用水稀释15 倍，将实验鱼浸于菌液中20 min。对照组为自然组。
观察感染发病的病鱼症状，发现死鱼及时捞出，解剖检查其内脏器官病变情况，同时作细菌分离。
2 结果
2.1 流行情况
该病的外观症状类似草鱼赤皮病和鱼类溃疡综合症，但业者参照草鱼赤皮病和鱼类溃疡综合症的控制方法治疗并无疗效。经过我校水产动物病害教研室解剖检查，病鱼有腹水，肌肉、心脏、肝脏、肾脏、脾脏、生殖腺、肠系膜等有明显的黄白色结节，体表“红斑”是由于皮肤中的结节溃烂所引起的。由于在水族箱里面饲养，发病无明显季节性，终生易感染发病。因无有效治疗药物，死亡率达90％以上。
2.2 病鱼症状
患病初期，病鱼体表有擦伤或损伤症状，反应迟钝，食欲下降，上浮水面离群独游。随着病情加重，部分病鱼体表开始充血、发炎，逐渐溃烂，各鳍也有溃烂出血，随后逐渐死亡。解剖观察，内脏有明显的病变，心、脾、肾等内脏稍有肿大，而且有大量白色结节(图1) ，直径1～3mm。将结节内物质作涂片，镜检发现大量短或细长杆状或分枝状革兰氏阳性菌体。
2.3 细菌分离
心、脾、肾组织上的白色结节在小川培养基上长出淡黄色沙粒状菌落，在TSA 培养基上长出白色沙粒状菌落。将菌落作涂片，观察到与直接用病鱼组织涂片相同的菌体。在这些培养基上未见其它细菌生长。
2.4 回归感染结果
感染试验结果表明， 该菌即为招财鱼结节病的病原菌，对招财鱼有较强的致病性， 病程较长，死亡率100%(表1) 。
试验鱼在感染后10d 左右，注射和浸泡组有鱼开始游动迟缓，上浮水面，体表和各鳍基部有发红或出血症状，随后几天连续有鱼死亡，到20d 时这两组全部死亡。而口灌感染组没有死亡， 也无任何症状。3组对照无任何症状。
发病鱼解剖发现心、脾都有大量白色结节，肾脏充血，肿大，肝脏稍肿大，变白灰色。与自然发病鱼症状基本相似。从病变组织心、脾、肾、肝、肌肉中均分离到纯度一致的细菌，菌落形态、菌体形态及基本理化特性与从自然发病鱼体分离的原菌株完全一致。
2.5 病原菌的生物学特性
2.5.1 形态特征
病原菌革兰氏阳性，好氧，具有弱抗酸性，菌体呈长或短杆状， 或细长分枝状，常断裂成杆状至球状体，直径0.2～1.0μm，长2.0～5.0μm ，丝状体长10～50μm。可单个、成对、Y 或V字状排列或排列成栅状，有假分枝，并具膨大或棒状末端。不运动，不生孢子。
2.5.2 生长特性及菌丝体
病原菌生长缓慢，在TSA和小川培养基上28℃， 7～10d 才能长出，菌落呈白色或淡黄色沙粒状，粗糙易碎，边缘不整齐，在表面形成皱折。用扦片法观察到该菌基丝发达、繁茂，呈分枝状(图2) 。
2.5.3 生理生化特性
病原菌过氧化氢酶阳性、氧化酶阴性，还原硝酸盐，不水解酪素、黄嘌呤、酪氨酸、淀粉和明胶，能以柠檬酸盐为唯一碳源生长，具有诺卡氏菌属特有的生理生化特征 (表2)。根据形态、生长和生理生化特征，确定病原菌属于诺卡氏菌属( Nocardia sp) 。
3 分析与讨论
招财鱼在观赏鱼市场上一种比较受欢迎的大型热带鱼，因此在繁殖生物学、苗种培育、池塘养殖技术等方面有很多人进行了研究，并获得成功。但招财鱼养殖中对病害发生原因研究的很少，没有明确病原是细菌还是病毒。只是根据发病症状进行报道，如出血病、腹水病等。诺卡氏菌曾是日本鰤鱼养殖中最主要的病原菌之一，也是大西洋牡蛎养殖的主要病原菌之一。诺卡氏菌是一种革兰氏阳性丝状杆菌，广泛分布在土壤、活性污泥、水、动植物和人的组织中，以腐生为主，一些菌株是人和动物的致病菌。近年来，在我国大黄鱼网箱养殖中也发现了鰤鱼诺卡氏菌(Nacardia seriolea) ，对大黄鱼的养殖造成了巨大损失。可见诺卡氏菌对鱼类养殖的危害性是巨大的。1989年台湾陈石柱等在黑鱼上发现星状诺卡氏菌(Nocardia asteraids)。病原发生的原因和流行病规律还不清楚，有待进一步研究。
诺卡氏菌在淡水中的含量实际并不高，曾被认为是一种条件致病菌，当养殖鱼类体质虚弱、免疫力低下时， 通过腮或鱼体受伤处而感染。从回归感染试验结果分析， 注射和浸泡感染都能使实验鱼致病，而口灌感染不致病，这说明在自然情况下该菌从鱼体损伤部位或通过鳃部进入体内的机会较大，而通过饵料进入体内的机会较小。从发病器官来看，发病最严重的器官都是与血液循环有密切关系的器管， 说明该菌是通过进入血液循环而达到各器官，然后在各器官组织中固着，逐渐生成菌丝体而形成结节。由此推断，在自然情况下由于养殖的集约化程度高，养殖密度大，鱼体容易损伤，体质下降。由此，给病原菌提供了致病机会。
由于诺卡氏菌生长较慢，造成病情不剧烈，在发病前期无症状或症状不明显， 但病情持续时间长，发病率和死亡率都较高，故给该病的早期诊断和防治带来极大困难。诺卡氏菌曾危害日本养殖多年，被认为是日本水产养殖中最主要的病原菌之一。也是大西洋牡蛎养殖的主要病原菌之。近年来对我国台湾水产养殖业影响较大，先后在乌鳢、大口鲈和招财鱼等养殖鱼类中感染诺卡氏菌，造成巨大的经济损失。
招财鱼诺卡氏菌病是在我国大陆观赏鱼养殖中首次发现，也是国内外养殖招财鱼首次发现感染诺卡氏菌，应该引起相关学者的关注。在水产动物养殖中， 对致病诺卡氏菌的相关研究并不多，故有必要对招财鱼诺卡氏菌病在病原菌的快速检测和预防治疗等方面作进一步研究。（作者：信阳农业高等专科学校水产系 林 伟 吴坤杰 杨治国）《当代水产》7月刊
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